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活细胞红色荧光失踪探针(CM-DiI)图片
产品货号:
KM0008
中文名称:
活细胞红色荧光失踪探针(CM-DiI)
英文名称:
CellTracker CM-DiI
产品规格:
50μg|5×50μg|10×50μg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品在DiI结构上加入了具中度巯基反应性的CM氯甲基替代基团,使其能与细胞内含巯基的肽和蛋白结合,使其能抵抗醛类的固定作用。不同于传统的细胞膜探针PKH26和DiI,CM-DiI在细胞固定、破膜及石蜡包埋的整个过程中均能很好的保留在细胞内,因此,特别适合同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化、荧光原位杂交或电镜观察的分析实验。本制品具有良好的示踪特征:对细胞无毒,稳定长效,染料很好保留在胞内,生理pH下荧光信号非常强。


1.使用方便,只需吸掉培养液,加入探针,30min孵育,显微成像即可;
2.荧光信号至少可持续72h以上(一般3-6代),染料只传到子代细胞,不会染上邻近细胞;
3.毒性很低,不会影响细胞增殖和活力;
4.红色激发/发射的光谱特性(Ex/Em=553/570nm),适合同绿色荧光染料或蛋白联合使用进行多重标记。


CAS号:180854-97-1
分子式:C68H105Cl2N3O
分子量:1051.5g/mol
纯度:≥95%
外观:红色固体
Ex/Em:553/570nm(甲醇)
推荐滤光器:Omega-XF32,Chroma-31002
溶解性:溶于DMSO,乙醇,DMF
保存:-20℃干燥避光保存,有效期一年


注意:以下使用方法仅用作参考,可根据具体的实验条件做出调整。

一、染色液制备
1.储存液制备:用DMF、DMSO或乙醇配置浓度1~2mM的储存液。例如,将50μgCM-DiI(Mw:1051.5g/mol)溶于48μL无水DMSO中,充分溶解,即得到1mM的储存液。
  注意:未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融,且避光干燥保存。
2.工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或DPBS)稀释储存液,调整到1~2μM的工作浓度。
  注意:最佳的工作浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。

二、细胞染色
1.于实验前准备好染色工作液;
2.加染色工作液进入待标记细胞,37℃孵育≤5min,然后再于4℃孵育15min。
  注:低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用,有助于染料对质膜的标记,并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性。
3.染色结束后,用PBS清洗细胞,并用新鲜培养基重悬细胞。
  注意:对于贴壁细胞,可直接在其贴壁状态下进行荧光标记,相较于消化处理后的细胞呈现更高活力。

三、细胞染色后处理
1.经CM-DiI染色后的细胞置于3.7%(w/v)多聚甲醛(溶于PBS),于37℃固定10min;
2.室温条件,用PBS清洗2次,每次5min;
3.于-20℃中,用丙酮透化处理10min;
4.室温条件PBS清洗2次,每次5min;
5.之后根据自身的实验要求以及细胞类型,进行后续的实验如石蜡包埋-免疫组化分析,电镜分析等。

资料显示:
①经CM-DiI染色后的PC12大鼠嗜铬细胞瘤细胞兼容于2%(w/v)多聚甲醛固定和0.2%(w/v)Triton X-100的透化作用;
②经绵阳淋巴系统纯化的CM-DiI标记细胞,经甲醛固定,石蜡包埋,切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇、水化后仍能维持荧光。
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